1. 儀器清洗與高壓消毒
l將雙蒸水、玻璃儀器、采精杯等物品用清水清洗乾淨, 然後放入高壓滅菌鍋內進行高壓蒸汽滅菌。
l高壓條件:121℃下滅菌20min。
滅菌結束後, 待高壓鍋溫度降至一定溫度, 壓力錶的壓力降至0時, 打開高壓鍋, 取出滅菌物品放入乾燥箱中進行乾燥。
乾燥條件:80℃, 40min。
2. 稀釋液的配製與保存
稀釋粉要根據其要求的溫度進行保存, 取出稀釋粉, 將稀釋粉倒入滅菌的燒杯中, 加入一定量的滅菌雙蒸水, 在磁力攪拌器上進行充分溶解。
將溶解後的稀釋液倒入容量瓶中, 根據稀釋粉的稀釋要求進行定容。
將配製好的稀釋液倒入廣口瓶中備用。
剩餘的稀釋液放入17℃的冰箱內保存(一般在配製後24小時內用完)。
l注意事項:稀釋液要在使用前一個小時配製好。 具體參見不同稀釋粉的使用說明。
3. 儀器的準備及預熱
采精杯的準備:將一次性采精袋放進滅菌後的保溫杯中,
儀器準備及預熱:
打開恒溫載物台,與顯微鏡連接,溫度設定在35℃-37℃,並在其上放置載玻片與蓋玻片。
打開水浴鍋,將配製好的稀釋液放入水浴鍋中加熱至35℃-37℃,並在稀釋液中放置兩個溫度計。
打開精子密度儀,準備好檢測片。
將輸精瓶放入37℃的溫箱中預熱。
精液的稀釋與分裝1. 背景與目的
豬精液採集後,首先要評定公豬精液品質,然後才能對精液進行進一步處理,以獲取高品質的精液。處理精液以前,選擇能有效篩選精液的方法對提高豬場的繁殖性能是必要的。在最理想的情況下,在精液處理前對公豬的精液進行全面地評估,以鑒別出那些劣質精液。對儲藏的精液,每天必須檢查總活動精子數和評估精子的外形
l新採集的精液精子濃度高,溫度也較高,精子的代謝強度大,很快就會產生大量的代謝產物,並使其自身的生命耗盡。即使在很短的時間內,都可能因精子的代謝產物而造成對精子的毒害,使得精子保存的時間縮短。使用合理的稀釋液稀釋精液,可給精子提供營養,中和代謝產物,並且允許精液降溫,從而大大延長精子的存活時間,同時保持精子的受精能力。
對精液儘快進行稀釋十分重要,這也是為什麼要將實驗室建在采精室隔壁的原因。另外,原精液的精子濃度大,而一次輸精所需的總精子數僅幾十個億,只相當於幾毫升到十幾毫升的原精,而母豬授精時需要的總精液量又不能低於100毫升,這也是為什麼必須稀釋的另一個原因。
增加精液容量,以確保每頭母豬輸精的總精液量。
有利於精子的體外存活和受精能力的維持。
2. 精液的視覺檢查
精液被送進實驗室之後,首先去掉采精容器上的薄紗布,確保不要有殘渣和塵土混入,以免影響精液的品質。
將精液袋從采精杯中拿出,並將精液倒入測量杯中。
對精液進行外觀檢查:
顏色:正常精液應該是乳白色或灰白色,就像脫脂乳。如果精液呈微紅或棕色,則說明混有血液;如果精液呈淡黃色,則說明可能混有尿液。變色精液應該棄之。
氣味:正常精液應該呈中性,略帶腥味,沒有不良氣味。如果精液中有氨味和尿味,就說明精液中可能混有氨氣和尿液,應該棄去不用。
3. 精液的儀器檢查
對精液進行外觀檢查之後,要對精液做進一步檢查:
品質:使用電子稱對精液品質進行稱量。
活力:使用顯微鏡對精液活力進行檢查。精子的活力是指原精液在37℃下呈直線運動的精子占全部精子總數的百分率。精液活力不能低於70%,活力低於70%的精液應該棄去。測定方法是將一滴原精液(10?l)滴在一張預熱的顯微鏡載玻片上(37℃),將載玻片放於恒溫載物台(37℃)之上,然後在顯微鏡下(400倍)觀察精子活力。
c)密度:使用精子密度測定儀對精子密度進行測定。
操作流程:用玻璃棒取少量精液,將精液滴在密度儀載玻片前端的空隙內, 然後將密度儀載玻片放入精子密度測定儀進行測定,讀取讀數。則該精液的密度為:讀數×(10)7,比如一份精液檢測後精子密度儀的讀數為225,則這份精液的密度就是225×(10)7。
d)精子畸形檢查:每次精液檢測合格後都要留樣,在載玻片上進行抹片,經過乾燥、脫水、染色等處理,然後在顯微鏡下觀察。正常精子形態像蝌蚪,形態異常的活力不高,為了保證受胎率必須檢查精子的形態。
精子畸形一般分四類:
I.頭部異常,頭部巨大、瘦小、細長、圓形、輪廓不明顯、皺縮、缺損、雙頭等;
II.頸部異常,頸部膨大、纖細、曲折、不全、雙頸等;
III.尾部異常,彎曲、短小、缺損、雙尾等;
IV.頂體異常,頂體不完全、異形。其中頂體完整率對受精影響最大。
精子畸形檢查流程
一份合格的精液應該符合以下要求:
精液檢查注意事項
精液檢測全程必須避光進行。
檢查精液活力時受人為影響比較大,要求操作者技術熟練。
檢測精子密度時,等精子密度儀完全歸零後再推入載玻片,待讀數穩定後再讀取資料。
在精液稀釋後再進行一次精液活力檢查,確保精液品質。
精子畸形必須定期進行,檢測時視野要具有隨機性,不能挑選檢測。
每次檢測之後要對設備進行清理檢查。
4. 精液稀釋倍數
目前,尚無每頭份精液的最低精子數標準和體積標準,但一般認為一次輸入15億以上個精子,對受胎率和產仔數是有保證的,但也沒有必要每頭份超過60億個精子。
人工授精的正常劑量一般為30-50億個精子/劑量,體積為80-100 ml。美國採用30億/頭份(80 ml);我國一般採用40億左右 /頭份(100 ml)。一般情況,同一種稀釋液,精子密度越大,所消耗能量越多,保存時間越短。
在原精液的活力(≥0.7)合格的前提下,決定精液最終稀釋倍數的因素有三個方面:
原精液的精子濃度
用於輸精的每份精液的體積或重量
每份精液的有效精子數
計算精液的稀釋倍數並不是最終目的,最終目的是得到原精液經過稀釋最終達到的體積以及可分裝的份數。但最大稀釋的倍數最好不超過原精液體積的10倍。
5. 精液稀釋的計算方法
6. 精液的稀釋過程
①把空塑膠杯或大燒杯放在電子秤上除去皮重。
②將原精液從集精杯中提出放入塑膠杯或燒杯中。
③將稀釋液的溫度調至與精液(35-37℃)等溫(溫差≤1℃)。
④將與精液等溫的稀釋液緩緩加入杯中,邊注入邊輕輕攪勻,直到達到根據計算得到的稀釋總重量為止。
⑤稀釋過程中先進行1:1低倍稀釋,攪拌均勻後再將餘下的稀釋液緩慢加入。不能將稀釋液直接倒入精液,因精子需要一個適應過程。
⑥稀釋完後再次進行精子活力檢測。
精液稀釋注意事項
精液和稀釋液的溫差應盡可能小或是在等溫情況下進行稀釋,精液稀釋關鍵是溫度,在精液稀釋前,必須使精液和稀釋液盡可能等溫,兩者的溫度最多相差1℃。否則就可能對精子的活力產生不良影響。如果可能,在采精前就對稀釋液進行預熱。
應將稀釋液加入精液中,而不應該相反。
稀釋液應儘量沿杯壁緩慢流入原精液中,避免將稀釋液直接倒下,形成衝擊。
精液稀釋的成敗,與所用儀器的清潔衛生有很大關係。所有使用過的燒杯、玻璃棒及溫度計,都要及時用蒸餾水洗滌,並進行消毒,這是稀釋後的精液能保存、利用的重要條件。
精液稀釋後要進行檢查活力,活力下降必須查明原因並加以改進。
7. 精液分裝
精液稀釋好後,應再一次檢查精子活力,活力應無明顯下降,否則棄之。
調好精液分裝機,以80ML為單位(根據需要而定),將精液分裝至精液瓶或袋。如果沒有精液分裝機,則需要人工分裝,注意將精液沿精液瓶內壁緩緩倒入。
l空氣中的氧氣不利於精子的保存,因此在封裝時應盡可能將其中存留的空氣排出。
a)精液瓶在擰上蓋子時,先將瓶蓋旋大半圈左右,然後擠壓瓶體使精液液面上升至瓶口,再旋緊,以排出瓶中空氣。
b)袋裝精液在封口時,也應該先將其中空氣擠壓,使精液面上升到接近封口處的高度,再用封口機熱封
l精液標記:便於確認精液的來源、是否在保質期內,便於進行與配母豬的相關配種資料登記。每個品種的精液用不同顏色的精液瓶或袋區分,並貼上標籤,標明品種、公豬耳號、采精日期、總精子數和活力等。
8. 精液儲存確定並核對需要貯存精液的資訊。
分裝好的精液,不能立即放入17 ℃冰箱,應置22℃-25℃室溫1小時左右,以免因溫度下降過快而刺激精子,造成死精增多。在分裝台上鋪上毛巾,在精液等待降溫時,精液上邊也蓋上毛巾,使精液溫度的緩慢降低。
待精液溫度下降接近室溫,把精液置於17℃的恒溫冰箱中進行保存。
填寫精液保存報表。 l從精液放入冰箱開始,每隔12小時需要小心搖勻一次(上下顛倒),防止精子沉澱引起死亡。
每次搖勻時,填寫時間與冰箱溫度。
精液的分裝與儲存注意事項l分裝室應定期進行消毒,保持乾淨衛生。
l操作人員進入實驗室前需在準備間完成更衣,消毒程式。
l裝精液用的瓶子和袋子必須為對精子無毒害作用的塑膠製品。
l精液放入恒溫冰箱時,不同品種精液應分開放置,以免拿錯精液。
l精液貯存時應該平放置於恒溫冰箱中,不可疊放。 恒溫冰箱必須放置靈敏的高低溫度計,以便準確檢查其溫度
恒溫冰箱應一直處於通電狀態,安裝報警裝置。
儘量減少冰箱門的開放次數,防止頻繁升降溫度造成對精子的打擊。
每天必須檢查恒溫冰箱的溫度並進行記錄,若出現停電應全面檢查儲存精液的品質。
精液儲存時間應根據稀釋液的種類而定,但無論何種稀釋液保存精液,應儘快用完。
精液的包裝與運輸1. 精液包裝前的準備
包裝材料:
長途保溫箱:泡沫箱
短途保溫箱:車載17℃恒溫箱
恒溫膠袋:長效,溫度變化緩慢
封箱膠帶:寬(5cm左右)而透明的膠帶
包裝前的準備:
將所需泡沫保溫箱和恒溫膠袋放入16-18℃環境中,不少於5h。?
需運輸外售的精液置於17℃恒溫冰箱內保存至少3h。
2. 精液包裝與運輸
精液的包裝:需短途運輸的精液由兩層黑色塑膠袋包裹,放置在17℃恒溫箱內;需長途運輸的精液放在兩層泡沫箱中。
無論袋裝或瓶裝精液都需平鋪疊放,袋裝精液,四層放一層恒溫膠袋;瓶裝精液,兩層放一層恒溫膠袋。若泡沫箱未裝滿,可用塊狀泡沫填充,以免運輸顛簸致使精液瓶/袋混亂且精液受到震動。
蓋上蓋子,用膠帶將箱體的縫隙密封好。
填寫精液資訊卡,內容包括精液種類、數量、類型(袋裝或瓶裝)、采精時間、包裝時間、準備人姓名等,並將其貼于箱蓋上,用透明膠帶蓋住。
箱蓋子上正規寫好收貨人的姓名及聯繫電話,便於接收。
精液運輸:
短途運輸:當精液送到農場外部,打開恒溫箱,取出精液,將最外層的塑膠袋解開,留在農場外,將精液放入農場專用保溫箱內。
長途運輸:選擇合適的運輸方式將精液運至目的地。
3. 注意事項
包裝運輸過程中避免溫度波動過大,從而對精子造成損傷。
注意泡沫箱的厚度,太薄不具有良好的保溫性能,其壁越厚,保溫性能越好。
包裹精液的塑膠袋選用黑色,避免陽光中紫外線對精子的損傷。
包裝過程中避免精液袋、瓶過度擁擠,防止局部溫度不均。
運輸過程中應選擇路途平坦的路徑,儘量避免精液震盪。
儀器準備及預熱:
打開恒溫載物台,與顯微鏡連接,溫度設定在35℃-37℃,並在其上放置載玻片與蓋玻片。
打開水浴鍋,將配製好的稀釋液放入水浴鍋中加熱至35℃-37℃,並在稀釋液中放置兩個溫度計。
打開精子密度儀,準備好檢測片。
將輸精瓶放入37℃的溫箱中預熱。
精液的稀釋與分裝1. 背景與目的
豬精液採集後,首先要評定公豬精液品質,然後才能對精液進行進一步處理,以獲取高品質的精液。處理精液以前,選擇能有效篩選精液的方法對提高豬場的繁殖性能是必要的。在最理想的情況下,在精液處理前對公豬的精液進行全面地評估,以鑒別出那些劣質精液。對儲藏的精液,每天必須檢查總活動精子數和評估精子的外形
l新採集的精液精子濃度高,溫度也較高,精子的代謝強度大,很快就會產生大量的代謝產物,並使其自身的生命耗盡。即使在很短的時間內,都可能因精子的代謝產物而造成對精子的毒害,使得精子保存的時間縮短。使用合理的稀釋液稀釋精液,可給精子提供營養,中和代謝產物,並且允許精液降溫,從而大大延長精子的存活時間,同時保持精子的受精能力。
對精液儘快進行稀釋十分重要,這也是為什麼要將實驗室建在采精室隔壁的原因。另外,原精液的精子濃度大,而一次輸精所需的總精子數僅幾十個億,只相當於幾毫升到十幾毫升的原精,而母豬授精時需要的總精液量又不能低於100毫升,這也是為什麼必須稀釋的另一個原因。
增加精液容量,以確保每頭母豬輸精的總精液量。
有利於精子的體外存活和受精能力的維持。
2. 精液的視覺檢查
精液被送進實驗室之後,首先去掉采精容器上的薄紗布,確保不要有殘渣和塵土混入,以免影響精液的品質。
將精液袋從采精杯中拿出,並將精液倒入測量杯中。
對精液進行外觀檢查:
顏色:正常精液應該是乳白色或灰白色,就像脫脂乳。如果精液呈微紅或棕色,則說明混有血液;如果精液呈淡黃色,則說明可能混有尿液。變色精液應該棄之。
氣味:正常精液應該呈中性,略帶腥味,沒有不良氣味。如果精液中有氨味和尿味,就說明精液中可能混有氨氣和尿液,應該棄去不用。
3. 精液的儀器檢查
對精液進行外觀檢查之後,要對精液做進一步檢查:
品質:使用電子稱對精液品質進行稱量。
活力:使用顯微鏡對精液活力進行檢查。精子的活力是指原精液在37℃下呈直線運動的精子占全部精子總數的百分率。精液活力不能低於70%,活力低於70%的精液應該棄去。測定方法是將一滴原精液(10?l)滴在一張預熱的顯微鏡載玻片上(37℃),將載玻片放於恒溫載物台(37℃)之上,然後在顯微鏡下(400倍)觀察精子活力。
c)密度:使用精子密度測定儀對精子密度進行測定。
操作流程:用玻璃棒取少量精液,將精液滴在密度儀載玻片前端的空隙內, 然後將密度儀載玻片放入精子密度測定儀進行測定,讀取讀數。則該精液的密度為:讀數×(10)7,比如一份精液檢測後精子密度儀的讀數為225,則這份精液的密度就是225×(10)7。
d)精子畸形檢查:每次精液檢測合格後都要留樣,在載玻片上進行抹片,經過乾燥、脫水、染色等處理,然後在顯微鏡下觀察。正常精子形態像蝌蚪,形態異常的活力不高,為了保證受胎率必須檢查精子的形態。
精子畸形一般分四類:
I.頭部異常,頭部巨大、瘦小、細長、圓形、輪廓不明顯、皺縮、缺損、雙頭等;
II.頸部異常,頸部膨大、纖細、曲折、不全、雙頸等;
III.尾部異常,彎曲、短小、缺損、雙尾等;
IV.頂體異常,頂體不完全、異形。其中頂體完整率對受精影響最大。
精子畸形檢查流程
一份合格的精液應該符合以下要求:
精液檢查注意事項
精液檢測全程必須避光進行。
檢查精液活力時受人為影響比較大,要求操作者技術熟練。
檢測精子密度時,等精子密度儀完全歸零後再推入載玻片,待讀數穩定後再讀取資料。
在精液稀釋後再進行一次精液活力檢查,確保精液品質。
精子畸形必須定期進行,檢測時視野要具有隨機性,不能挑選檢測。
每次檢測之後要對設備進行清理檢查。
4. 精液稀釋倍數
目前,尚無每頭份精液的最低精子數標準和體積標準,但一般認為一次輸入15億以上個精子,對受胎率和產仔數是有保證的,但也沒有必要每頭份超過60億個精子。
人工授精的正常劑量一般為30-50億個精子/劑量,體積為80-100 ml。美國採用30億/頭份(80 ml);我國一般採用40億左右 /頭份(100 ml)。一般情況,同一種稀釋液,精子密度越大,所消耗能量越多,保存時間越短。
在原精液的活力(≥0.7)合格的前提下,決定精液最終稀釋倍數的因素有三個方面:
原精液的精子濃度
用於輸精的每份精液的體積或重量
每份精液的有效精子數
計算精液的稀釋倍數並不是最終目的,最終目的是得到原精液經過稀釋最終達到的體積以及可分裝的份數。但最大稀釋的倍數最好不超過原精液體積的10倍。
5. 精液稀釋的計算方法
6. 精液的稀釋過程
①把空塑膠杯或大燒杯放在電子秤上除去皮重。
②將原精液從集精杯中提出放入塑膠杯或燒杯中。
③將稀釋液的溫度調至與精液(35-37℃)等溫(溫差≤1℃)。
④將與精液等溫的稀釋液緩緩加入杯中,邊注入邊輕輕攪勻,直到達到根據計算得到的稀釋總重量為止。
⑤稀釋過程中先進行1:1低倍稀釋,攪拌均勻後再將餘下的稀釋液緩慢加入。不能將稀釋液直接倒入精液,因精子需要一個適應過程。
⑥稀釋完後再次進行精子活力檢測。
精液稀釋注意事項
精液和稀釋液的溫差應盡可能小或是在等溫情況下進行稀釋,精液稀釋關鍵是溫度,在精液稀釋前,必須使精液和稀釋液盡可能等溫,兩者的溫度最多相差1℃。否則就可能對精子的活力產生不良影響。如果可能,在采精前就對稀釋液進行預熱。
應將稀釋液加入精液中,而不應該相反。
稀釋液應儘量沿杯壁緩慢流入原精液中,避免將稀釋液直接倒下,形成衝擊。
精液稀釋的成敗,與所用儀器的清潔衛生有很大關係。所有使用過的燒杯、玻璃棒及溫度計,都要及時用蒸餾水洗滌,並進行消毒,這是稀釋後的精液能保存、利用的重要條件。
精液稀釋後要進行檢查活力,活力下降必須查明原因並加以改進。
7. 精液分裝
精液稀釋好後,應再一次檢查精子活力,活力應無明顯下降,否則棄之。
調好精液分裝機,以80ML為單位(根據需要而定),將精液分裝至精液瓶或袋。如果沒有精液分裝機,則需要人工分裝,注意將精液沿精液瓶內壁緩緩倒入。
l空氣中的氧氣不利於精子的保存,因此在封裝時應盡可能將其中存留的空氣排出。
a)精液瓶在擰上蓋子時,先將瓶蓋旋大半圈左右,然後擠壓瓶體使精液液面上升至瓶口,再旋緊,以排出瓶中空氣。
b)袋裝精液在封口時,也應該先將其中空氣擠壓,使精液面上升到接近封口處的高度,再用封口機熱封
l精液標記:便於確認精液的來源、是否在保質期內,便於進行與配母豬的相關配種資料登記。每個品種的精液用不同顏色的精液瓶或袋區分,並貼上標籤,標明品種、公豬耳號、采精日期、總精子數和活力等。
8. 精液儲存確定並核對需要貯存精液的資訊。
分裝好的精液,不能立即放入17 ℃冰箱,應置22℃-25℃室溫1小時左右,以免因溫度下降過快而刺激精子,造成死精增多。在分裝台上鋪上毛巾,在精液等待降溫時,精液上邊也蓋上毛巾,使精液溫度的緩慢降低。
待精液溫度下降接近室溫,把精液置於17℃的恒溫冰箱中進行保存。
填寫精液保存報表。 l從精液放入冰箱開始,每隔12小時需要小心搖勻一次(上下顛倒),防止精子沉澱引起死亡。
每次搖勻時,填寫時間與冰箱溫度。
精液的分裝與儲存注意事項l分裝室應定期進行消毒,保持乾淨衛生。
l操作人員進入實驗室前需在準備間完成更衣,消毒程式。
l裝精液用的瓶子和袋子必須為對精子無毒害作用的塑膠製品。
l精液放入恒溫冰箱時,不同品種精液應分開放置,以免拿錯精液。
l精液貯存時應該平放置於恒溫冰箱中,不可疊放。 恒溫冰箱必須放置靈敏的高低溫度計,以便準確檢查其溫度
恒溫冰箱應一直處於通電狀態,安裝報警裝置。
儘量減少冰箱門的開放次數,防止頻繁升降溫度造成對精子的打擊。
每天必須檢查恒溫冰箱的溫度並進行記錄,若出現停電應全面檢查儲存精液的品質。
精液儲存時間應根據稀釋液的種類而定,但無論何種稀釋液保存精液,應儘快用完。
精液的包裝與運輸1. 精液包裝前的準備
包裝材料:
長途保溫箱:泡沫箱
短途保溫箱:車載17℃恒溫箱
恒溫膠袋:長效,溫度變化緩慢
封箱膠帶:寬(5cm左右)而透明的膠帶
包裝前的準備:
將所需泡沫保溫箱和恒溫膠袋放入16-18℃環境中,不少於5h。?
需運輸外售的精液置於17℃恒溫冰箱內保存至少3h。
2. 精液包裝與運輸
精液的包裝:需短途運輸的精液由兩層黑色塑膠袋包裹,放置在17℃恒溫箱內;需長途運輸的精液放在兩層泡沫箱中。
無論袋裝或瓶裝精液都需平鋪疊放,袋裝精液,四層放一層恒溫膠袋;瓶裝精液,兩層放一層恒溫膠袋。若泡沫箱未裝滿,可用塊狀泡沫填充,以免運輸顛簸致使精液瓶/袋混亂且精液受到震動。
蓋上蓋子,用膠帶將箱體的縫隙密封好。
填寫精液資訊卡,內容包括精液種類、數量、類型(袋裝或瓶裝)、采精時間、包裝時間、準備人姓名等,並將其貼于箱蓋上,用透明膠帶蓋住。
箱蓋子上正規寫好收貨人的姓名及聯繫電話,便於接收。
精液運輸:
短途運輸:當精液送到農場外部,打開恒溫箱,取出精液,將最外層的塑膠袋解開,留在農場外,將精液放入農場專用保溫箱內。
長途運輸:選擇合適的運輸方式將精液運至目的地。
3. 注意事項
包裝運輸過程中避免溫度波動過大,從而對精子造成損傷。
注意泡沫箱的厚度,太薄不具有良好的保溫性能,其壁越厚,保溫性能越好。
包裹精液的塑膠袋選用黑色,避免陽光中紫外線對精子的損傷。
包裝過程中避免精液袋、瓶過度擁擠,防止局部溫度不均。
運輸過程中應選擇路途平坦的路徑,儘量避免精液震盪。